차가버섯 의 효과
1. 차가(Chaga)균핵(菌核)
러시아 시베리아의 하바로브스크 (비야스코예) 및 캄차카의 북방산지에서 1992년 채집되어 약 1개월간 자연건조 후 70℃에서 4.5시간 통풍건조한 차가 10㎏을 분쇄하여 2㎜ 체를 통과한 분말을 실험에 사용했다.
또 OECD 화학물질독성 시험지침(1981년)에 준해서 실시한 급성경구독성실험결과를 보면 1회의 경구투여에 의한 치사량은 실험용쥐(암수각각) 모두 차가분말검체 5000㎎/㎏ 이상 에서 독성은 확인되지 않았다.
2. 배양 및 균사체의 생산
사면배양(斜面培養)
송이배지(glucose 20g, 에비오스분말 5g, 한천 20g, 수돗물 1천㎖, 1N HCl 1.6㎖, pH 5.1˜6.0)를 사용했다. 직경 16.5㎜의 시험관에 약 10㎖분주(分注)한 것을 사용했다.
배양
액체배체; 관행대로 조제한 potato glucose 배지를 25㎖넣고 멸균한 100㎖용 삼각플라스크를 사용했다.
톱밥배지:
자작나무분말과 미강을 4:1(W/W)의 비율로 혼합하여 수분을 58˜62%로 조정한 후 폴리프로필렌 푸대에 1.2㎏을 넣고 121℃에서 60분 고압멸균했다. 미강 대신에 맥기울도 이용.
현미배지:
현미를 물에 4시간 침적하여 소쿠리에 올려 1시간정도 물기를 쫙 빼었다. 간이 찜질기로 5분정도 예비찜질을 실시, 표면을 풀처럼 만들어 이를 봉투 또는 병(800g)에 넣고 121℃에서 40분간 고압멸균했다.
소맥배지 현미배지와 같은 방법으로 소맥을 이용하여 조제.
3. 수용성 다당의 분별
차가분말 5백g에 90%의 에탄올 3ℓ를 첨가, 실온에서 24시간 교반(攪拌)을 4회 반복하여 저분자물질(FS)을 추출제거했다. 얻어진 찌꺼기를 열수추출(100℃, 6시간, 5회반복)하여 얻어진 여액에 4배의 에탄올을 첨가, 다당을 침전시켰다~.
침전은 물로 용해하여 흐르는 물에 투석(透析)했다. 그 내액(內液)에 유안(硫安)을 30% 포화한 후, 다음에 100%포화시킴으로써 다당침전획분 F1S-1 및 FIS-Ⅱ를 얻었다
FIS-1은 DEAE-Toyopearl 650 M 칼륨을 사용하고 이어서 Toyopearl HW 65R 칼륨을 사용하여 각각 FIS-1, FIS-2 및 FIS-3, 나아가 FISⅠ-2-A와 FIS-Ⅰ-3-A로 분획(分劃)했다.
수용성 다당의 분획법과 얻어진 획분의 수량을 <그림 1>에 표시했고 또 균사체로부터의 다당분획법과 과수량을 <그림 3>에 나타냈다.
4. 불수용성 다당의 분획정제
위의 처리로 얻은 차가의 열수출 잔사Ⅱ를 10% 염화아연으로 100℃에서 6시간, 4회추출, 이어서 5% 수산화나트륨으로 온실에서 24시간, 2회순차추출을 반복해주므로써 각각 조다당획분 FⅡ, FⅢ-1, FⅢ-2를 얻었다.
게다가 Toyopearl HW 65F Calium을 사용한 gel여과(濾過)에 의해 세분획하여 각각 FⅡ-1과 FⅡ-2, FⅢ-1-A, FⅢ-1-B, FⅢ-1-C: FⅢ-S-A와 FⅢ-S-B를 얻었다.
불수용성 다당분획의 조제법과 수량을 <그림 4>에 나타내었고 또 균사체로부터의 동다당체분획을 <그림 3>에 정리했다.
5. 항종양실험 (효소법)
사람 간암의 세포분열과정에 있어서 S 및 M 두 개의 단계를 경과하지만 그 간에 각각 G1 및 G2의 ?gap? periods가 존재한다.
이들 시기에 2백종 이상의 protein kinases가 관여하고 있어 cyclin존재의 6종의 kinase, phosphatase cdk1-cdk6의 prototype으로서 cdc2/cyclin A,B,C,D의 존재가 알려져 있고 여기에 관여하는 cdc2/cyclin B kinase 및 이를 활성화하는 cdc2 phosphatase, cdc25 phosphatase 등의 억제제가 발암저해와 밀접한 관계가 있다는 것이 L. Meijer에 의해서 분명해졌다.
그래서 프랑스의 CNRS생물연구소의 협력을 얻어 제암실험을 했다. 시험법은 문헌에 따라서 다당체의 항종양 활성은 cdc25 phosphatase 50% 저해치(ID50, ㎍/㎖)를 가지고 비교했다. 수치가 작을수록 고활성을 표시한다.
6. 혈당강하작용
일본 SLC社에서 구입한 5주령의 ddy계 웅성쥐를 21℃항온, 60%항습 사육실에서 라보MR스톡크 (일본농산공업 제조)의 사료를 이용해서 사육했다.
다당시료는 생리식염수에 용해하고 대조군은 생리식염수만을 투여했다. 경시적으로 안와정맥(眼窩靜脈)에서 채혈하여 그 혈청 농도를 glucose oxidase법에 기초한 glucose B test와코(화광순약)로 측정했다. 실험전, 실험 중에도 물, 먹이는 자유로이 섭취시켰다.
7. 다당의 이화학성의 분석
아래 항목에 대해서 다당의 화학분석과 자기분석을 실시했다.
(1) 다당함량: 페놀유산법(비색법)
(2) 단백함량: 개량Lowry법(비색법)-확인
(3) 구성 당조성: 산수해액에 대해서 PPC,GLC법
(4) 단백의 아미노산조성: 염산에 의한 가수분해액을 아미노산 자동분석계에 의함
(5) 평균 분자량: gel여과법
(6) 비선광도: 자동선광계
(7) IR-Spectra: 적외 분석계
(8) NMR-Spectra: 1H- 및 13C-NMR분석계
결과 및 고찰
양자 모두 당질이 주성분이며 이에 이어서 균사체는 단백과 섬유가, Chaga(균핵)는 섬유와 회분함량이 높다.
미네랄로는 망간 함유량이 높다. 당질의 대부분은 불소화성의 식물(食物)섬유이며 균핵으로는 건물당 66%, 균사체에서도 50%에 달한다.
기타 후라보노이드, 토리텔페노이드, 알칼로이드, 포테린, 아가리친산, 이노시톨 등의 존재도 지적되고 있다.
효과
차가버섯의 균핵 'Chaga' 및 균사체에서 다당류를 추출, 분획했다. 이들에 대해서 항종양 활성 및 혈당강하작용을 시험하여 아래와 같은 결과를 얻었다
Chaga 수용성 다당 및 불수용성 다당에는 항종양활성과 모두 정상쥐의 혈당치를 강하시키는 효과가 인정되었다.
이의 본체는 베타-구루칸(Hetertoglucan) 몇 이들의 단백복합체였다. 균사체에서 조제된 다당에는 현저한 항종양성은 인정되지 않았으나 주사에 의해서 3˜48시간 지속되는 혈당강하작용이 확인되었다.
결과적으로 배양균사체의 약리작용보다 천연 chaga의 약리작용이 우수하다는 것이 검증 되었다. |
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